近日，日本名古屋大学Kazuhiro Furuhashi团队在《Stem Cells and Development》发表题为“Evaluation of Puromycin-Induced Podocyte Injury and Protective Effects of Voclosporin Using Induced Pluripotent Stem Cells from a Patient with Nephrotic Syndrome Harboring an INF2 Variant”的研究。该研究利用携带INF2基因变异的遗传性局灶节段性肾小球硬化症（FSGS）患者来源的诱导多能干细胞（iPSC），成功分化出含足细胞的肾脏类器官，并以此构建了嘌呤霉素氨基核苷（PAN）诱导的足细胞损伤模型。在此基础上，团队验证了环孢素A（CsA）和伏环孢素（VCS）两种钙调磷酸酶抑制剂（CNI）的足细胞保护作用，为遗传性FSGS的药物筛选和机制研究提供了新的实验平台。

为建立遗传性局灶节段性肾小球硬化症（FSGS）的实验平台，研究者首先从患者来源的诱导多能干细胞（iPSC）分化出含足细胞的肾脏类器官。免疫荧光证实类器官表达Podocalyxin、WT1、Nephrin和α-actinin 4等足细胞特异性标志物，电镜观察到典型足突结构，从蛋白和超微结构层面确认了足细胞身份，为后续药物实验提供了可靠模型。（图1）

在此基础上，研究者进一步验证该模型是否适用于足细胞损伤研究。结果显示，嘌呤霉素氨基核苷（PAN）能以浓度依赖方式特异性诱导足细胞损伤。随PAN浓度升高（0～30 μg/mL），Podocalyxin荧光逐渐减弱，而E-cadherin和LTL基本不变。定量分析表明，从3 μg/mL起各浓度组荧光强度均显著低于对照组，且呈明确剂量-效应关系，证实了该损伤模型的有效性和可量化性。（图2）

在成功建立损伤模型后，研究者利用该体系评估了两种钙调磷酸酶抑制剂（CNI）的保护效果。环孢素A（CsA）和伏环孢素（VCS）预处理均能显著减轻PAN诱导的足细胞损伤，两者效果相当。蛋白免疫印迹（WB）结果显示，PAN上调cleaved caspase-3和γH2AX表达，而两种药物预处理可使这些指标回落，提示其保护作用可能与抑制凋亡和减轻DNA损伤有关。该结果为VCS在INF2相关FSGS中的潜在应用提供了实验依据。（图3）